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　　细胞名称：SPC-A-1人肺腺癌细胞

　　描述：这株细胞源自一位男性肺腺癌患者。

　　动物种别：人

　　性别：男

　　组织来源：肺癌

　　形态：上皮细胞样

　　培养基和添加剂：RPMI-1640(GIBCO,货号31800022,添加NaHCO3 1.5g/L,glucose 2.5g/L,Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。

　　供应限制：A。仅供研究之用。

　　REFERENCE:Tumor(Shanghai)1:255,1981.Chinese Journal of Cancer 21(11):1117-1121,2002 Tumor 22(1):2-4,2002 Chin J Lung Cancer 5(2):123-125,2002 Chin J Immunol 18(9):618-620,2002 China J Cancer Prev Treat 9(3):249-251,2002 Immunological Journal 18(4):299-302,2002 Acta Biochimica et Biophysica Sinica 35(6):548-553,2003 Tumor 23(3):194-196,2003 Chinese Journal of Cancer 22(2):171-174,2003 Journal of Shandong University(Health Sciences)41(3):235-237,2003

　　SPC-A-1人肺腺癌细胞接受后处理

　　1)收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

　　2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

　　3)弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。

　　4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

　　5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

　　SPC-A-1人肺腺癌细胞培养操作

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

　　1.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

　　2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

　　3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。